मॉडिक बदलांचे प्राणि-प्रतिरूप तयार करण्यासाठी कमरेच्या मणक्यातील उपास्थीच्या खालील हाडात स्व-शरीरातील न्यूक्लियस पल्पोससचे रोपण करणे.

Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद. तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझरच्या आवृत्तीमध्ये CSS साठी मर्यादित समर्थन आहे. सर्वोत्तम परिणामांसाठी, आम्ही नवीन ब्राउझर वापरण्याची (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमधील कंपॅटिबिलिटी मोड अक्षम करण्याची) शिफारस करतो. यादरम्यान, सतत समर्थन सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही ही साइट स्टाईल्स आणि जावास्क्रिप्टशिवाय प्रदर्शित करू.
मॉडिक चेंज (MC) च्या अभ्यासासाठी प्राण्यांवरील मॉडेलची स्थापना हा एक महत्त्वाचा आधार आहे. चोपन्न न्यूझीलंड व्हाइट सशांना शॅम-ऑपरेशन गट, स्नायू प्रत्यारोपण गट (ME गट) आणि न्यूक्लियस पल्पोसस प्रत्यारोपण गट (NPE गट) यांमध्ये विभागले गेले. NPE गटामध्ये, अँटेरोलॅटरल लंबर सर्जिकल अप्रोचद्वारे इंटरव्हर्टेब्रल डिस्क उघडी करण्यात आली आणि एंड प्लेटजवळ L5 व्हर्टेब्रल बॉडीला सुईने पंक्चर करण्यात आले. L1/2 इंटरव्हर्टेब्रल डिस्कमधून सिरिंजने NP काढून त्यात इंजेक्ट करण्यात आले. सबकॉन्ड्रल बोनमध्ये छिद्र पाडण्यात आले. स्नायू प्रत्यारोपण गट आणि शॅम-ऑपरेशन गटातील शस्त्रक्रिया प्रक्रिया आणि ड्रिलिंग पद्धती NP प्रत्यारोपण गटाप्रमाणेच होत्या. ME गटामध्ये, छिद्रामध्ये स्नायूचा एक तुकडा ठेवण्यात आला, तर शॅम-ऑपरेशन गटामध्ये छिद्रामध्ये काहीही ठेवण्यात आले नाही. ऑपरेशननंतर, एमआरआय स्कॅनिंग आणि आण्विक जैविक चाचण्या करण्यात आल्या. NPE गटामध्ये सिग्नल बदलला, परंतु शॅम-ऑपरेशन गट आणि ME गटामध्ये कोणताही स्पष्ट सिग्नल बदल दिसून आला नाही. ऊतकशास्त्रीय निरीक्षणातून असे दिसून आले की, रोपण स्थानी असामान्य ऊतींची वाढ झाली होती आणि NPE गटामध्ये IL-4, IL-17 व IFN-γ यांची अभिव्यक्ती वाढली होती. सबकॉन्ड्रल अस्थीमध्ये NP चे रोपण करून MC चे एक प्राणिजन्य मॉडेल तयार केले जाऊ शकते.
मॉडिक बदल (MC) हे मणक्याच्या एंडप्लेट्स आणि लगतच्या अस्थिमज्जेचे घाव आहेत जे चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (MRI) वर दिसतात. संबंधित लक्षणे असलेल्या व्यक्तींमध्ये ते खूप सामान्य आहेत¹. अनेक अभ्यासांनी कंबरदुखी (LBP) शी असलेल्या संबंधामुळे MC च्या महत्त्वावर जोर दिला आहे²,³. डी रॉस एट अल.⁴ आणि मॉडिक एट अल.⁵ यांनी स्वतंत्रपणे मणक्याच्या अस्थिमज्जेतील सबकॉन्ड्रल सिग्नल असामान्यतेचे तीन भिन्न प्रकार प्रथम वर्णन केले. मॉडिक प्रकार I बदल T1-वेट (T1W) सिक्वेन्सवर हायपोइंटेन्स आणि T2-वेट (T2W) सिक्वेन्सवर हायपरइंटेन्स असतात. या घावामध्ये अस्थिमज्जेमध्ये फिशर एंडप्लेट्स आणि लगतचे व्हॅस्क्युलर ग्रॅन्युलेशन टिश्यू दिसून येतात. मॉडिक प्रकार II बदल T1W आणि T2W दोन्ही सिक्वेन्सवर उच्च सिग्नल दर्शवतात. या प्रकारच्या घावामध्ये, एंडप्लेटचा नाश, तसेच लगतच्या अस्थिमज्जेची हिस्टोलॉजिकल फॅटी रिप्लेसमेंट आढळू शकते. मॉडिक प्रकार III बदल T1W आणि T2W सिक्वेन्समध्ये कमी सिग्नल दर्शवतात. एंडप्लेट्सशी संबंधित स्क्लेरोटिक घाव आढळून आले आहेत⁶. MC हा पाठीच्या कण्याचा एक रोग मानला जातो आणि तो पाठीच्या कण्याच्या अनेक अपक्षयी रोगांशी जवळून संबंधित आहे7,8,9.
उपलब्ध माहितीचा विचार करता, अनेक अभ्यासांनी एमसीच्या कारणमीमांसा आणि रोगविषयक यंत्रणांबद्दल सविस्तर माहिती दिली आहे. अल्बर्ट आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी सुचवले की एमसी डिस्क हर्निएशनमुळे होऊ शकते⁸. हू आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी एमसीचे कारण तीव्र डिस्क डिजनरेशन असल्याचे सांगितले¹⁰. क्रोक यांनी "इंटर्नल डिस्क रप्चर" ही संकल्पना मांडली, ज्यानुसार डिस्कला वारंवार होणाऱ्या आघातामुळे एंडप्लेटमध्ये सूक्ष्म फाटणे (मायक्रोटिअर्स) होऊ शकते. फाटणे तयार झाल्यानंतर, न्यूक्लियस पल्पोसस (NP) द्वारे एंडप्लेटचा नाश झाल्यामुळे ऑटोइम्यून प्रतिसाद सुरू होऊ शकतो, ज्यामुळे पुढे एमसीचा विकास होतो¹¹. मा आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी असेच मत मांडले आणि अहवाल दिला की एनपी-प्रेरित ऑटोइम्यूनिटी एमसीच्या रोगजननात महत्त्वाची भूमिका बजावते¹².
रोगप्रतिकारक शक्तीच्या पेशी, विशेषतः CD4+ टी हेल्पर लिम्फोसाइट्स, ऑटोइम्युनिटीच्या रोगजननात महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावतात¹³. अलीकडेच शोधलेला Th17 उपसंच प्रोइन्फ्लेमेटरी सायटोकाइन IL-17 तयार करतो, केमोकाइन अभिव्यक्तीला प्रोत्साहन देतो आणि खराब झालेल्या अवयवांमधील टी पेशींना IFN-γ तयार करण्यासाठी उत्तेजित करतो¹⁴. Th2 पेशी देखील रोगप्रतिकारक प्रतिसादांच्या रोगजननात एक अद्वितीय भूमिका बजावतात. Th2 पेशींचे प्रतिनिधी म्हणून IL-4 ची अभिव्यक्ती गंभीर इम्युनोपॅथॉलॉजिकल परिणामांना कारणीभूत ठरू शकते¹⁵.
जरी MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 वर अनेक क्लिनिकल अभ्यास केले गेले असले तरी, मानवांमध्ये वारंवार होणाऱ्या MC प्रक्रियेची नक्कल करू शकणाऱ्या आणि रोगकारणशास्त्र किंवा लक्ष्यित उपचारांसारख्या नवीन उपचारांचा शोध घेण्यासाठी वापरल्या जाऊ शकणाऱ्या योग्य प्राणी प्रायोगिक मॉडेल्सची अजूनही कमतरता आहे. आजपर्यंत, अंतर्निहित रोगविषयक यंत्रणांचा अभ्यास करण्यासाठी MC च्या केवळ काही प्राणी मॉडेल्सची नोंद केली गेली आहे.
अल्बर्ट आणि मा यांनी मांडलेल्या ऑटोइम्यून सिद्धांतावर आधारित, या अभ्यासात ड्रिल केलेल्या कशेरुकाच्या एंड प्लेटजवळ एनपीचे ऑटोट्रान्सप्लांटेशन करून एक सोपे आणि पुनरुत्पादक ससा एमसी मॉडेल स्थापित केले गेले. प्राण्यांच्या मॉडेलची हिस्टोलॉजिकल वैशिष्ट्ये पाहणे आणि एमसीच्या विकासात एनपीच्या विशिष्ट यंत्रणांचे मूल्यांकन करणे हे इतर उद्देश आहेत. यासाठी, आम्ही एमसीच्या प्रगतीचा अभ्यास करण्यासाठी आण्विक जीवशास्त्र, एमआरआय आणि हिस्टोलॉजिकल अभ्यास यांसारख्या तंत्रांचा वापर करतो.
शस्त्रक्रियेदरम्यान रक्तस्रावामुळे दोन ससे मरण पावले आणि एमआरआय करताना भूल देत असताना चार ससे मरण पावले. उर्वरित ४८ ससे वाचले आणि शस्त्रक्रियेनंतर त्यांच्यात वर्तणुकीशी संबंधित किंवा मज्जासंस्थेची कोणतीही लक्षणे दिसली नाहीत.
एमआरआय दर्शवते की वेगवेगळ्या छिद्रांमधील अंतर्भूत ऊतींची सिग्नल तीव्रता भिन्न आहे. एनपीई गटामध्ये एल५ कशेरुकाच्या शरीराची सिग्नल तीव्रता रोपणानंतर १२, १६ आणि २० आठवड्यांनी हळूहळू बदलली (टी१डब्ल्यू सिक्वेन्सने कमी सिग्नल दर्शविला, आणि टी२डब्ल्यू सिक्वेन्सने मिश्र सिग्नल अधिक कमी सिग्नल दर्शविला) (आकृती १सी), तर त्याच कालावधीत अंतर्भूत भागांच्या इतर दोन गटांचे एमआरआय स्वरूप तुलनेने स्थिर राहिले (आकृती १ए, बी).
(अ) सशाच्या कमरेच्या मणक्याचे ३ वेगवेगळ्या वेळी घेतलेले प्रातिनिधिक अनुक्रमिक एमआरआय. शॅम-ऑपरेशन गटाच्या प्रतिमांमध्ये कोणतीही सिग्नल असामान्यता आढळली नाही. (ब) एमई गटातील कशेरुकाच्या मुख्य भागाची सिग्नल वैशिष्ट्ये शॅम-ऑपरेशन गटासारखीच आहेत आणि कालांतराने एम्बेडिंग साइटवर कोणताही लक्षणीय सिग्नल बदल दिसून येत नाही. (क) एनपीई गटामध्ये, टी१डब्ल्यू सिक्वेन्समध्ये कमी सिग्नल स्पष्टपणे दिसतो आणि टी२डब्ल्यू सिक्वेन्समध्ये मिश्र सिग्नल आणि कमी सिग्नल स्पष्टपणे दिसतात. १२ आठवड्यांच्या कालावधीपासून ते २० आठवड्यांच्या कालावधीपर्यंत, टी२डब्ल्यू सिक्वेन्समधील कमी सिग्नलच्या सभोवतालचे तुरळक उच्च सिग्नल कमी होतात.
NPE गटामध्ये कशेरुकाच्या रोपण स्थानी स्पष्ट अस्थी अतिवृद्धी (बोन हायपरप्लासिया) दिसून येते, आणि NPE गटाच्या तुलनेत १२ ते २० आठवड्यांमध्ये ही अस्थी अतिवृद्धी अधिक वेगाने होते (आकृती २C). मॉडेल केलेल्या कशेरुकांमध्ये कोणताही लक्षणीय बदल दिसून येत नाही; शॅम गट आणि ME गट (आकृती २C) २A,B).
(अ) रोपण केलेल्या भागातील कशेरुकाचा पृष्ठभाग खूप गुळगुळीत आहे, छिद्र व्यवस्थित भरून येते आणि कशेरुकामध्ये हायपरप्लासिया (अतिवृद्धी) होत नाही. (ब) एमई (ME) गटातील रोपण केलेल्या जागेचा आकार शॅम ऑपरेशन (sham operation) गटासारखाच आहे आणि कालांतराने रोपण केलेल्या जागेच्या स्वरूपात कोणताही स्पष्ट बदल दिसून येत नाही. (क) एनपीई (NPE) गटामध्ये रोपण केलेल्या जागेवर अस्थी हायपरप्लासिया (अतिवृद्धी) झाला. अस्थी हायपरप्लासिया वेगाने वाढला आणि तो आंतरकशेरुकीय चकतीमधून (intervertebral disc) दुसऱ्या बाजूच्या कशेरुकापर्यंत पसरला.
ऊतीशास्त्रीय विश्लेषण अस्थी निर्मितीबद्दल अधिक तपशीलवार माहिती प्रदान करते. आकृती ३ मध्ये H&E ने रंगवलेल्या शस्त्रक्रियेनंतरच्या भागांची छायाचित्रे दर्शविली आहेत. शॅम-ऑपरेशन गटामध्ये, कॉन्ड्रोसाइट्स चांगल्या प्रकारे व्यवस्थित होते आणि पेशींची वाढ आढळली नाही (आकृती ३अ). एमई गटातील परिस्थिती शॅम-ऑपरेशन गटासारखीच होती (आकृती ३ब). तथापि, एनपीई गटामध्ये, रोपण स्थानी मोठ्या संख्येने कॉन्ड्रोसाइट्स आणि एनपी-सारख्या पेशींची वाढ दिसून आली (आकृती ३क);
(अ) एंड प्लेटजवळ ट्रॅबेक्यूली दिसतात, कॉन्ड्रोसाइट्स व्यवस्थितपणे मांडलेले असून त्यांचा आकार आणि स्वरूप एकसमान आहे आणि त्यात कोणतीही वाढ झालेली नाही (४० पट). (ब) एमई गटातील रोपण स्थळाची स्थिती शॅम गटासारखीच आहे. ट्रॅबेक्यूली आणि कॉन्ड्रोसाइट्स दिसतात, परंतु रोपण स्थळी कोणतीही स्पष्ट वाढ झालेली नाही (४० पट). (ब) असे दिसून येते की कॉन्ड्रोसाइट्स आणि एनपी-सारख्या पेशींमध्ये लक्षणीय वाढ होते आणि कॉन्ड्रोसाइट्सचा आकार व स्वरूप असमान आहे (४० पट).
NPE आणि ME या दोन्ही गटांमध्ये इंटरल्युकिन 4 (IL-4) mRNA, इंटरल्युकिन 17 (IL-17) mRNA, आणि इंटरफेरॉन γ (IFN-γ) mRNA यांची अभिव्यक्ती तपासण्यात आली. जेव्हा लक्ष्य जनुकांच्या अभिव्यक्तीच्या पातळीची तुलना केली गेली, तेव्हा ME गट आणि शॅम ऑपरेशन गटाच्या तुलनेत NPE गटामध्ये IL-4, IL-17, आणि IFN-γ यांची जनुकीय अभिव्यक्ती लक्षणीयरीत्या वाढलेली आढळली (आकृती 4) (P < 0.05). शॅम ऑपरेशन गटाच्या तुलनेत, ME गटामध्ये IL-4, IL-17, आणि IFN-γ यांच्या अभिव्यक्तीच्या पातळीत केवळ किंचित वाढ झाली आणि त्यात सांख्यिकीय बदल आढळला नाही (P > 0.05).
NPE गटामध्ये IL-4, IL-17 आणि IFN-γ चे mRNA अभिव्यक्ती शॅम ऑपरेशन गट आणि ME गटाच्या तुलनेत लक्षणीयरीत्या जास्त होती (P < 0.05).
त्याउलट, ME गटामध्ये अभिव्यक्ती पातळीत कोणताही लक्षणीय फरक दिसून आला नाही (P>0.05).
बदललेल्या mRNA अभिव्यक्ती पद्धतीची पुष्टी करण्यासाठी IL-4 आणि IL-17 विरुद्ध व्यावसायिकरित्या उपलब्ध अँटीबॉडीज वापरून वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण करण्यात आले. आकृती 5A,B मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, ME गट आणि शॅम ऑपरेशन गटाच्या तुलनेत, NPE गटामध्ये IL-4 आणि IL-17 ची प्रथिन पातळी लक्षणीयरीत्या वाढली होती (P < 0.05). शॅम ऑपरेशन गटाच्या तुलनेत, ME गटामध्ये देखील IL-4 आणि IL-17 ची प्रथिन पातळी सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण बदलांपर्यंत पोहोचू शकली नाही (P> 0.05).
(अ) NPE गटामध्ये IL-4 आणि IL-17 ची प्रथिन पातळी ME गट आणि प्लेसिबो गटापेक्षा लक्षणीयरीत्या जास्त होती (P < 0.05). (ब) वेस्टर्न ब्लॉट हिस्टोग्राम.
शस्त्रक्रियेदरम्यान मिळणाऱ्या मानवी नमुन्यांची संख्या मर्यादित असल्यामुळे, एमसीच्या रोगजननावर स्पष्ट आणि सविस्तर अभ्यास करणे काहीसे अवघड आहे. आम्ही एमसीच्या संभाव्य रोगविषयक यंत्रणांचा अभ्यास करण्यासाठी त्याचे एक प्राणी मॉडेल स्थापित करण्याचा प्रयत्न केला. त्याच वेळी, एनपी ऑटोग्राफ्टमुळे प्रेरित झालेल्या एमसीच्या प्रगतीचा मागोवा घेण्यासाठी रेडिओलॉजिकल मूल्यांकन, हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन आणि आण्विक जैविक मूल्यांकनाचा वापर करण्यात आला. परिणामी, एनपी इम्प्लांटेशन मॉडेलमध्ये १२ आठवड्यांपासून ते २० आठवड्यांपर्यंतच्या कालावधीत सिग्नल तीव्रतेमध्ये हळूहळू बदल दिसून आला (टी१डब्ल्यू सिक्वेन्समध्ये मिश्र कमी सिग्नल आणि टी२डब्ल्यू सिक्वेन्समध्ये कमी सिग्नल), जो ऊतींमधील बदल दर्शवतो, आणि हिस्टोलॉजिकल व आण्विक जैविक मूल्यांकनांनी रेडिओलॉजिकल अभ्यासाच्या निष्कर्षांची पुष्टी केली.
या प्रयोगाच्या निकालांवरून असे दिसून येते की, NPE गटामध्ये कशेरुकाच्या शरीराच्या उल्लंघनाच्या ठिकाणी दृश्य आणि ऊतीशास्त्रीय बदल झाले. त्याच वेळी, IL-4, IL-17 आणि IFN-γ जनुकांची अभिव्यक्ती, तसेच IL-4, IL-17 आणि IFN-γ यांचे निरीक्षण करण्यात आले, जे दर्शवते की कशेरुकाच्या शरीरातील स्वजातीय न्यूक्लियस पल्पोसस ऊतींच्या उल्लंघनामुळे सिग्नल आणि आकारशास्त्रीय बदलांची एक मालिका होऊ शकते. हे सहज लक्षात येते की, प्राणी मॉडेलच्या कशेरुकांच्या शरीराची सिग्नल वैशिष्ट्ये (T1W सिक्वेन्समध्ये कमी सिग्नल, T2W सिक्वेन्समध्ये मिश्र सिग्नल आणि कमी सिग्नल) मानवी कशेरुकाच्या पेशींसारखीच आहेत, आणि MRI वैशिष्ट्ये देखील ऊतीशास्त्र आणि स्थूल शरीररचनाशास्त्राच्या निरीक्षणांची पुष्टी करतात, म्हणजेच, कशेरुकाच्या शरीराच्या पेशींमधील बदल प्रगतीशील आहेत. जरी तीव्र आघातामुळे होणारी दाहक प्रतिक्रिया टोचल्यानंतर लगेच दिसू शकते, तरी एमआरआयच्या निकालांवरून असे दिसून आले की, टोचल्यानंतर १२ आठवड्यांनी सिग्नलमध्ये क्रमशः वाढणारे बदल दिसू लागले आणि एमआरआयमधील बदलांमध्ये सुधारणेची किंवा उलटण्याची कोणतीही चिन्हे न दिसता ते २० आठवड्यांपर्यंत टिकून राहिले. हे निकाल सूचित करतात की सशांमध्ये प्रोग्रेसिव्ह एमव्ही (progressive MV) स्थापित करण्यासाठी ऑटोलॉगस व्हर्टेब्रल एनपी (autologous vertebral NP) ही एक विश्वसनीय पद्धत आहे.
या पंक्चर मॉडेलसाठी पुरेसे कौशल्य, वेळ आणि शस्त्रक्रियात्मक प्रयत्नांची आवश्यकता असते. प्राथमिक प्रयोगांमध्ये, पॅराव्हर्टेब्रल लिगामेंटस संरचनांचे विच्छेदन किंवा अत्याधिक उत्तेजनामुळे मणक्यांमध्ये ऑस्टिओफाईट्स (हाडांची वाढ) तयार होऊ शकतात. शेजारील डिस्कला इजा होणार नाही किंवा त्यांना त्रास होणार नाही याची काळजी घेतली पाहिजे. सातत्यपूर्ण आणि पुनरावृत्तीयोग्य परिणाम मिळवण्यासाठी प्रवेशाची खोली नियंत्रित करणे आवश्यक असल्याने, आम्ही ३ मिमी लांबीच्या सुईचे आवरण कापून हाताने एक प्लग तयार केला. या प्लगच्या वापरामुळे मणक्याच्या मुख्य भागामध्ये ड्रिलिंगची खोली एकसमान राहते याची खात्री होते. प्राथमिक प्रयोगांमध्ये, शस्त्रक्रियेत सहभागी असलेल्या तीन ऑर्थोपेडिक सर्जनना १८-गेज सुई किंवा इतर पद्धतींपेक्षा १६-गेज सुई वापरण्यास अधिक सोपी वाटली. ड्रिलिंग दरम्यान जास्त रक्तस्त्राव टाळण्यासाठी, सुई काही काळ स्थिर ठेवल्यास प्रवेशासाठी अधिक योग्य छिद्र मिळते, यावरून असे सूचित होते की या पद्धतीने काही प्रमाणात एमसी (MC) नियंत्रित करता येते.
जरी अनेक अभ्यासांनी एमसीवर लक्ष केंद्रित केले असले तरी, एमसीच्या कारणमीमांसा आणि रोगजननशास्त्राबद्दल फार कमी माहिती आहे²⁵,²⁶,²⁷. आमच्या मागील अभ्यासांवर आधारित, आम्हाला आढळले की ऑटोइम्यूनिटी एमसीच्या उद्भव आणि विकासात महत्त्वाची भूमिका बजावते¹². या अभ्यासात अँटीजेन उत्तेजनानंतर CD4+ पेशींच्या मुख्य विभेदन मार्गांपैकी असलेल्या IL-4, IL-17 आणि IFN-γ च्या परिमाणात्मक अभिव्यक्तीचे परीक्षण केले गेले. आमच्या अभ्यासात, निगेटिव्ह गटाच्या तुलनेत, NPE गटामध्ये IL-4, IL-17 आणि IFN-γ ची अभिव्यक्ती जास्त होती आणि IL-4 व IL-17 ची प्रथिन पातळी देखील जास्त होती.
क्लिनिकली, डिस्क हर्निएशन असलेल्या रुग्णांच्या एनपी पेशींमध्ये IL-17 mRNA अभिव्यक्ती वाढलेली आढळते²⁸. निरोगी नियंत्रकांच्या तुलनेत, तीव्र नॉन-कॉम्प्रेसिव्ह डिस्क हर्निएशन मॉडेलमध्ये IL-4 आणि IFN-γ अभिव्यक्तीची पातळी वाढलेली आढळली²⁹. IL-17 दाह, ऑटोइम्यून रोगांमधील ऊतींच्या दुखापतीमध्ये महत्त्वाची भूमिका बजावते³⁰ आणि IFN-γ ला मिळणारा रोगप्रतिकारक प्रतिसाद वाढवते³¹. MRL/lpr उंदरांमध्ये³² आणि ऑटोइम्यूनिटी-संवेदनशील उंदरांमध्ये³³ IL-17-मध्यस्थ ऊतींची दुखापत वाढल्याचे नोंदवले गेले आहे. IL-4 प्रोइन्फ्लेमेटरी सायटोकाइन्स (जसे की IL-1β आणि TNFα) ची अभिव्यक्ती आणि मॅक्रोफेज सक्रियता रोखू शकते³⁴. असे नोंदवले गेले आहे की, त्याच वेळी NPE गटामध्ये IL-4 ची mRNA अभिव्यक्ती IL-17 आणि IFN-γ च्या तुलनेत वेगळी होती; NPE गटामध्ये IFN-γ ची mRNA अभिव्यक्ती इतर गटांपेक्षा लक्षणीयरीत्या जास्त होती. म्हणून, NP इंटरकॅलेशनमुळे प्रेरित झालेल्या दाहक प्रतिक्रियेमध्ये IFN-γ उत्पादन एक मध्यस्थ असू शकते. अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की IFN-γ हे सक्रिय प्रकार 1 हेल्पर टी पेशी, नैसर्गिक किलर पेशी आणि मॅक्रोफेजेस35,36 यासह अनेक प्रकारच्या पेशींद्वारे तयार केले जाते आणि ते एक प्रमुख प्रो-इन्फ्लेमेटरी सायटोकिन आहे जे रोगप्रतिकारक प्रतिसादांना प्रोत्साहन देते37.
या अभ्यासावरून असे सूचित होते की ऑटोइम्यून प्रतिसाद एमसीच्या (MC) निर्मिती आणि विकासात सामील असू शकतो. लुओमा आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी असे आढळले की एमआरआयवर (MRI) एमसी आणि प्रमुख एनपीची (NP) सिग्नल वैशिष्ट्ये समान आहेत आणि दोन्ही टी२डब्ल्यू (T2W) सिक्वेन्समध्ये उच्च सिग्नल दर्शवतात38. काही सायटोकाइन्स एमसीच्या निर्मितीशी जवळून संबंधित असल्याचे सिद्ध झाले आहे, जसे की आयएल-१ (IL-1)39. मा आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी असे सुचवले की एनपीचा (NP) वरचा किंवा खालचा फुगवटा एमसीच्या (MC) निर्मिती आणि विकासावर मोठा प्रभाव टाकू शकतो12. बोबेचको40 आणि हर्झबीन आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी41 असे नोंदवले की एनपी (NP) ही एक इम्युनोटॉलरंट ऊती आहे जी जन्मापासून रक्तवाहिन्यांमध्ये प्रवेश करू शकत नाही. एनपीचे (NP) फुगवटे रक्तपुरवठ्यात बाह्य घटक आणतात, ज्यामुळे स्थानिक ऑटोइम्यून प्रतिक्रिया घडतात42. ऑटोइम्यून प्रतिक्रिया मोठ्या संख्येने रोगप्रतिकारक घटक प्रेरित करू शकतात आणि जेव्हा हे घटक ऊतींच्या सतत संपर्कात येतात, तेव्हा ते सिग्नलिंगमध्ये बदल घडवू शकतात43. या अभ्यासात, आयएल-४ (IL-4), आयएल-१७ (IL-17) आणि आयएफएन-γ (IFN-γ) यांचे अतिअभिव्यक्ती हे वैशिष्ट्यपूर्ण रोगप्रतिकारक घटक आहेत, जे एनपी (NP) आणि एमसी (MC) यांच्यातील जवळचा संबंध अधिक सिद्ध करतात44. हे प्राणी मॉडेल एनपी ब्रेकथ्रू आणि एंड प्लेटमध्ये प्रवेश करण्याची प्रक्रिया अचूकपणे दर्शवते. या प्रक्रियेमुळे एमसीवरील ऑटोइम्युनिटीचा प्रभाव अधिक स्पष्ट झाला.
अपेक्षेप्रमाणे, हे प्राणी मॉडेल आपल्याला एमसीचा अभ्यास करण्यासाठी एक संभाव्य व्यासपीठ प्रदान करते. तथापि, या मॉडेलला अजूनही काही मर्यादा आहेत: पहिली गोष्ट म्हणजे, प्राण्यांच्या निरीक्षणाच्या टप्प्यात, काही मध्यवर्ती टप्प्यातील सशांना हिस्टोलॉजिकल आणि आण्विक जीवशास्त्र चाचणीसाठी इच्छामरण द्यावे लागते, त्यामुळे कालांतराने काही प्राणी "वापरातून बाद" होतात. दुसरी गोष्ट म्हणजे, जरी या अभ्यासात तीन वेळेचे टप्पे निश्चित केले असले तरी, दुर्दैवाने, आम्ही फक्त एका प्रकारच्या एमसीचे (मोडिक प्रकार I बदल) मॉडेलिंग केले आहे, त्यामुळे मानवी रोग विकास प्रक्रियेचे प्रतिनिधित्व करण्यासाठी ते पुरेसे नाही, आणि सर्व सिग्नल बदलांचे अधिक चांगल्या प्रकारे निरीक्षण करण्यासाठी अधिक वेळेचे टप्पे निश्चित करणे आवश्यक आहे. तिसरी गोष्ट म्हणजे, ऊतींच्या संरचनेतील बदल हिस्टोलॉजिकल स्टेनिंगद्वारे स्पष्टपणे दर्शविले जाऊ शकतात, परंतु काही विशेष तंत्रे या मॉडेलमधील सूक्ष्म-संरचनात्मक बदल अधिक चांगल्या प्रकारे प्रकट करू शकतात. उदाहरणार्थ, सशांच्या इंटरव्हर्टेब्रल डिस्कमध्ये फायब्रोकार्टिलेजच्या निर्मितीचे विश्लेषण करण्यासाठी पोलराइज्ड लाईट मायक्रोस्कोपीचा वापर केला गेला होता45. एमसी आणि एंडप्लेटवर एनपीच्या दीर्घकालीन परिणामांसाठी पुढील अभ्यासाची आवश्यकता आहे.
चौपन्न नर न्यूझीलंड व्हाईट सशांना (वजन सुमारे २.५-३ किलो, वय ३-३.५ महिने) यादृच्छिकपणे शॅम ऑपरेशन गट, स्नायू प्रत्यारोपण गट (एमई गट) आणि मज्जातंतू मूळ प्रत्यारोपण गट (एनपीई गट) यांमध्ये विभागण्यात आले. सर्व प्रायोगिक प्रक्रिया तियानजिन रुग्णालयाच्या नीती समितीने मंजूर केल्या होत्या आणि प्रायोगिक पद्धती मंजूर मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार काटेकोरपणे पार पाडण्यात आल्या.
एस. सोबाजिमा ४६ यांच्या शस्त्रक्रिया तंत्रात काही सुधारणा करण्यात आल्या आहेत. प्रत्येक सशाला एका कुशीवर झोपवण्यात आले आणि पोस्टेरोलॅटरल रेट्रोपेरिटोनियल पद्धतीचा वापर करून कमरेच्या मणक्यांमधील सलग पाच आंतरमणक्यांमधील चकत्यांचा (IVDs) पुढचा पृष्ठभाग उघडा करण्यात आला. प्रत्येक सशाला सर्वसाधारण भूल (२०% युरेथेन, ५ मिली/किलो कानाच्या शिरेद्वारे) देण्यात आली. बरगड्यांच्या खालच्या कडेपासून श्रोणीच्या काठापर्यंत, पॅराव्हर्टेब्रल स्नायूंपासून २ सेमी खाली त्वचेवर एक लांब छेद देण्यात आला. L1 ते L6 पर्यंतचा उजवा पुढचा-बाजूचा मणका, त्याच्यावरील त्वचेखालील ऊतक, रेट्रोपेरिटोनियल ऊतक आणि स्नायू यांचे धारदार व बोथट विच्छेदन करून उघडा करण्यात आला (आकृती ६अ). L5-L6 चकतीच्या पातळीसाठी श्रोणीच्या काठाचा शारीरिक खूण म्हणून वापर करून चकतीची पातळी निश्चित करण्यात आली. L5 मणक्याच्या एंड प्लेटजवळ ३ मिमी खोलीपर्यंत छिद्र पाडण्यासाठी १६-गेज पंक्चर सुईचा वापर करा (आकृती ६ब). L1-L2 आंतरकशेरुकीय चकतीमधील (इंटरव्हर्टेब्रल डिस्क) स्व-शरीरातील न्यूक्लियस पल्पोसस (autologous nucleus pulposus) शोषून घेण्यासाठी ५-मिली सिरिंजचा वापर करा (आकृती ६C). प्रत्येक गटाच्या गरजेनुसार न्यूक्लियस पल्पोसस किंवा स्नायू काढून टाका. ड्रिल होल अधिक खोल केल्यानंतर, शस्त्रक्रियेदरम्यान कशेरुकाच्या (व्हर्टेब्रल बॉडीच्या) पेरिऑस्टिअल ऊतींना इजा होणार नाही याची काळजी घेत, डीप फेशिया, सुपरफिशिअल फेशिया आणि त्वचेवर विरघळणारे टाके (absorbable sutures) घातले जातात.
(अ) पोस्टेरोलॅटरल रेट्रोपेरिटोनियल मार्गाने L5–L6 डिस्क उघड केली जाते. (ब) L5 एंडप्लेटजवळ छिद्र पाडण्यासाठी 16-गेज सुईचा वापर करा. (क) ऑटोलॉगस एमएफ्स (स्व-शरीरातील मायक्रोफायब्रोब्लास्ट्स) काढले जातात.
कानाच्या शिरेद्वारे 20% युरेथेन (5 मिली/किलो) देऊन सर्वसाधारण भूल देण्यात आली आणि शस्त्रक्रियेनंतर 12, 16 आणि 20 आठवड्यांनी कमरेच्या मणक्याचे एक्स-रे पुन्हा काढण्यात आले.
शस्त्रक्रियेनंतर १२, १६ आणि २० आठवड्यांनी सशांना केटामाइनचे (२५.० मिग्रॅ/किलो) स्नायूमध्ये इंजेक्शन देऊन आणि सोडियम पेंटोबार्बिटलचे (१.२ ग्रॅम/किलो) शिरेमध्ये इंजेक्शन देऊन मारण्यात आले. ऊतकशास्त्रीय विश्लेषणासाठी संपूर्ण मणका काढून त्याचे वास्तविक विश्लेषण करण्यात आले. रोगप्रतिकारक घटकांमधील बदल शोधण्यासाठी क्वांटिटेटिव्ह रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन (RT-qPCR) आणि वेस्टर्न ब्लॉटिंगचा वापर करण्यात आला.
ऑर्थोगोनल लिंब कॉइल रिसीव्हरने सुसज्ज असलेल्या ३.० टेस्ला क्लिनिकल मॅग्नेटचा (जीई मेडिकल सिस्टीम्स, फ्लॉरेन्स, एससी) वापर करून सशांमध्ये एमआरआय तपासण्या करण्यात आल्या. सशांना कानाच्या शिरेद्वारे २०% युरेथेन (५ मिली/किलो) देऊन भूल देण्यात आली आणि नंतर त्यांना मॅग्नेटमध्ये पाठीवर झोपवण्यात आले, ज्यात कमरेचा भाग ५-इंच व्यासाच्या गोलाकार सरफेस कॉइलवर (जीई मेडिकल सिस्टीम्स) मध्यभागी ठेवण्यात आला होता. L3–L4 ते L5–L6 पर्यंतच्या लंबर डिस्कचे स्थान निश्चित करण्यासाठी कोरोनल T2-वेटेड लोकेलायझर इमेजेस (TR, १४४५ मिलीसेकंद; TE, ३७ मिलीसेकंद) मिळवण्यात आल्या. सॅजिटल प्लेन T2-वेटेड स्लाइस खालील सेटिंग्जसह मिळवण्यात आल्या: फास्ट स्पिन-इको सिक्वेन्स, ज्यामध्ये रिपिटेशन टाइम (TR) २२०० मिलीसेकंद आणि इको टाइम (TE) ७० मिलीसेकंद होता, मॅट्रिक्स; २६० चे व्हिज्युअल फील्ड आणि आठ स्टिम्युली; कटिंगची जाडी २ मिमी होती, गॅप ०.२ मिमी होता.
शेवटचा फोटो काढल्यानंतर आणि शेवटच्या सशाला मारल्यानंतर, ऊतकशास्त्रीय तपासणीसाठी शॅम, मसल-एम्बेडेड आणि एनपी डिस्क काढण्यात आल्या. ऊती १०% न्यूट्रल बफर्ड फॉर्मेलिनमध्ये १ आठवड्यासाठी स्थिर करण्यात आल्या, एथिलीनडायअमाइनटेट्राॲसिटिक ॲसिडने त्यांचे विखनिजीकरण करण्यात आले आणि पॅराफिन सेक्शन कापण्यात आले. ऊतींचे ठोकळे पॅराफिनमध्ये एम्बेड करून मायक्रोटोमच्या साहाय्याने सॅजिटल सेक्शनमध्ये (५ μm जाडीचे) कापण्यात आले. या सेक्शनना हेमॅटॉक्सिलिन आणि इओसिन (H&E) ने रंगवण्यात आले.
प्रत्येक गटातील सशांमधून आंतरकशेरुकीय चकत्या गोळा केल्यानंतर, उत्पादकाच्या सूचनांनुसार UNIQ-10 कॉलम (शांघाय सँगॉन बायोटेक्नॉलॉजी कं, लि., चीन) आणि ImProm II रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणाली (प्रोमेगा इंक., मॅडिसन, WI, USA) वापरून एकूण RNA काढण्यात आले. रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन केले गेले.
उत्पादकाच्या सूचनांनुसार, प्रिझम ७३०० (अप्लाइड बायोसिस्टम्स इंक., यूएसए) आणि एसवायबीआर ग्रीन जंप स्टार्ट टॅक रेडीमिक्स (सिग्मा-अल्ड्रिच, सेंट लुईस, एमओ, यूएसए) वापरून आरटी-क्यूपीसीआर (RT-qPCR) करण्यात आले. पीसीआर अभिक्रियेचे आकारमान २० μl होते आणि त्यात १.५ μl विरल केलेले सीडीएनए (cDNA) आणि प्रत्येक प्रायमरचे ०.२ μM समाविष्ट होते. प्रायमर्स ओलिगोपरफेक्ट डिझायनर (इन्व्हिट्रोजन, व्हॅलेन्सिया, सीए) द्वारे डिझाइन केले गेले होते आणि नानजिंग गोल्डन स्टीवर्ट बायोटेक्नॉलॉजी कं., लि. (चीन) द्वारे उत्पादित केले गेले होते (तक्ता १). खालील थर्मल सायकलिंग परिस्थिती वापरण्यात आली: ९४°C वर २ मिनिटांसाठी प्रारंभिक पॉलिमरेज सक्रियकरण टप्पा, त्यानंतर ९४°C वर प्रत्येकी १५ सेकंदांची ४० चक्रे, ज्यामध्ये टेम्पलेट विनाशीकरण, ६०°C वर १ मिनिटासाठी ॲनीलिंग, विस्तार आणि प्रतिदीप्ती मापन ७२°C वर १ मिनिटासाठी करण्यात आले. सर्व नमुन्यांचे तीन वेळा प्रवर्धन करण्यात आले आणि RT-qPCR विश्लेषणासाठी सरासरी मूल्याचा वापर करण्यात आला. प्रवर्धन डेटाचे विश्लेषण FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) वापरून करण्यात आले. IL-4, IL-17, आणि IFN-γ जीन अभिव्यक्ती अंतर्जात नियंत्रक (ACTB) च्या तुलनेत सामान्यीकृत करण्यात आली. लक्ष्य mRNA च्या सापेक्ष अभिव्यक्ती पातळी 2-ΔΔCT पद्धतीचा वापर करून मोजण्यात आल्या.
RIPA लायसिस बफरमध्ये (ज्यात प्रोटीएज आणि फॉस्फेटेज इनहिबिटर कॉकटेल असते) टिश्यू होमोजिनायझर वापरून ऊतींमधून एकूण प्रथिने काढण्यात आली आणि नंतर ऊतींचे अवशेष काढून टाकण्यासाठी 4°C तापमानावर 20 मिनिटांसाठी 13,000 rpm वेगाने सेंट्रीफ्यूज करण्यात आले. प्रत्येक लेनमध्ये पन्नास मायक्रोग्रॅम प्रथिने लोड करण्यात आली, 10% SDS-PAGE द्वारे वेगळी करण्यात आली आणि नंतर PVDF मेम्ब्रेनवर स्थानांतरित करण्यात आली. खोलीच्या तापमानावर 1 तासासाठी 0.1% ट्विन 20 असलेल्या ट्रिस-बफर्ड सलाइन (TBS) मधील 5% नॉनफॅट ड्राय मिल्क वापरून ब्लॉकिंग करण्यात आले. मेम्ब्रेनला सशाच्या अँटी-डेकोरिन प्रायमरी अँटीबॉडी (1:200 प्रमाणात विरल केलेले; बोस्टर, वुहान, चीन) (1:200 प्रमाणात विरल केलेले; बायोस, बीजिंग, चीन) सोबत 4°C तापमानावर रात्रभर इनक्युबेट करण्यात आले आणि दुसऱ्या दिवशी त्यावर प्रक्रिया करण्यात आली; दुय्यम अँटीबॉडी (गोट अँटी-रॅबिट इम्युनोग्लोबुलिन जी १:४०,००० डायल्यूशनमध्ये) हॉर्सरॅडिश पेरॉक्सिडेज (बोस्टर, वुहान, चीन) सोबत खोलीच्या तापमानावर १ तासासाठी वापरण्यात आली. एक्स-रे किरणांनंतर केमिल्युमिनेसेंट मेम्ब्रेनवरील वाढलेल्या केमिल्युमिनेसन्सद्वारे वेस्टर्न ब्लॉट सिग्नल्स शोधण्यात आले. डेन्सिटोमेट्रिक विश्लेषणासाठी, बँडस्कॅन सॉफ्टवेअर वापरून ब्लॉट्स स्कॅन आणि क्वांटिफाय करण्यात आले आणि परिणाम टार्गेट जीन इम्युनोरिएक्टिव्हिटी आणि ट्युब्युलिन इम्युनोरिएक्टिव्हिटी यांच्या गुणोत्तराच्या स्वरूपात व्यक्त करण्यात आले.
सांख्यिकीय गणना SPSS16.0 सॉफ्टवेअर पॅकेज (SPSS, USA) वापरून करण्यात आल्या. अभ्यासादरम्यान गोळा केलेला डेटा सरासरी ± मानक विचलन (mean ± SD) म्हणून व्यक्त करण्यात आला आणि दोन गटांमधील फरक निश्चित करण्यासाठी एक-मार्गी पुनरावृत्त मापन विचलन विश्लेषण (ANOVA) वापरून त्याचे विश्लेषण करण्यात आले. P < 0.05 हे सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण मानले गेले.
अशाप्रकारे, कशेरुकामध्ये स्वजातीय एनपी रोपण करून आणि स्थूल-शारीरिक निरीक्षण, एमआरआय विश्लेषण, ऊतकशास्त्रीय मूल्यांकन आणि आण्विक जैविक विश्लेषण करून एमसीचे प्राणी मॉडेल स्थापित करणे, हे मानवी एमसीच्या यंत्रणांचे मूल्यांकन आणि आकलन करण्यासाठी तसेच नवीन उपचारात्मक हस्तक्षेप विकसित करण्यासाठी एक महत्त्वाचे साधन बनू शकते.
या लेखाचा संदर्भ कसा द्यावा: हान, सी. इत्यादी. कमरेच्या मणक्याच्या सबकॉन्ड्रल हाडात ऑटोलॉगस न्यूक्लियस पल्पोससचे रोपण करून मॉडिक बदलांचे एक प्राणी मॉडेल स्थापित केले गेले. सायन्स रिपोर्ट 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., आणि Boos, N. कमरेच्या मणक्याचे चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग: लक्षणविरहित स्वयंसेवकांमध्ये डिस्क हर्निएशन आणि रिटेंशन, नर्व्ह रूट कॉम्प्रेशन, एंड प्लेटमधील विकृती आणि फॅसेट जॉइंट ऑस्टियोआर्थरायटिसचे प्रमाण. दर. रेडिओलॉजी 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, आणि Leboeuf-Eed, K. मॉडिक बदल आणि त्यांचा क्लिनिकल निष्कर्षांशी संबंध. युरोपियन स्पाइन जर्नल: युरोपियन स्पाइन सोसायटी, युरोपियन सोसायटी ऑफ स्पाइनल डिफॉर्मिटी, आणि युरोपियन सोसायटी फॉर सर्व्हिकल स्पाइन रिसर्च यांचे अधिकृत प्रकाशन 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
कुइस्मा, एम., व इतर. कमरेच्या मणक्याच्या टोकाकडील पट्ट्यांमध्ये मोडिक बदल: मध्यमवयीन पुरुष कामगारांमध्ये कंबरदुखी आणि सायटिकाशी संबंध आणि त्याचे प्रमाण. स्पाइन 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
डी रॉस, ए., क्रेसेल, एच., स्प्रिट्झर, के., आणि डलिंका, एम. कमरेच्या मणक्याच्या डीजनरेटिव्ह रोगात एंड प्लेटजवळील अस्थिमज्जेतील बदलांचे एमआरआय. एजेआर. अमेरिकन जर्नल ऑफ रेडिओलॉजी 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
मोडिक, एमटी, स्टाइनबर्ग, पीएम, रॉस, जेएस, मासारिक, टीजे, आणि कार्टर, जेआर डिजनरेटिव्ह डिस्क डिसीज: एमआरआय द्वारे कशेरुकातील मज्जा बदलांचे मूल्यांकन. रेडिओलॉजी 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
मोडिक, एमटी, मासारिक, टीजे, रॉस, जेएस, आणि कार्टर, जेआर डिजनरेटिव्ह डिस्क डिसीजचे इमेजिंग. रेडिओलॉजी 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
जेन्सेन, टी.एस., आणि इतर. सामान्य लोकसंख्येमध्ये नवकशेरुकीय एंडप्लेट (मोडिक) सिग्नल बदलांचे भविष्यसूचक घटक. युरोपियन स्पाइन जर्नल: युरोपियन स्पाइन सोसायटी, युरोपियन सोसायटी ऑफ स्पाइनल डिफॉर्मिटी, आणि युरोपियन सोसायटी फॉर सर्व्हिकल स्पाइन रिसर्च यांचे अधिकृत प्रकाशन, विभाग 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
अल्बर्ट, एचबी आणि मॅनिश, के. लंबर डिस्क हर्निएशननंतर होणारे मोडिक बदल. युरोपियन स्पाइन जर्नल: युरोपियन स्पाइन सोसायटी, युरोपियन सोसायटी ऑफ स्पाइनल डिफॉर्मिटी आणि युरोपियन सोसायटी फॉर सर्व्हिकल स्पाइन रिसर्च यांचे अधिकृत प्रकाशन 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
केर्टुला, एल., लुओमा, के., वेहमास, टी., ग्रोनब्लाड, एम., आणि कापा, ई. मॉडिक प्रकार I बदल वेगाने वाढणाऱ्या विकृत डिस्क डिजेनेरेशनचा अंदाज लावू शकतात: एक 1-वर्षाचा प्रॉस्पेक्टिव्ह अभ्यास. युरोपियन स्पाइन जर्नल 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
हू, झेडजे, झाओ, एफडी, फँग, एक्सक्यू आणि फॅन, एसडब्ल्यू मॉडिक बदल: कमरेच्या डिस्कच्या ऱ्हासाची संभाव्य कारणे आणि योगदान. मेडिकल हायपोथेसिस 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
क्रोक, एचव्ही अंतर्गत डिस्क रप्चर. ५० वर्षांहून अधिक काळातील डिस्क प्रोलॅप्स समस्या. स्पाइन (फिला पा १९७६) ११, ६५०–६५३ (१९८६).